通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)產品簡介

莫洛尼鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MLV RT）是一種RNA依賴的DNA聚合酶，能使mRNA（>5kb）轉錄為cDNA。M-MLV RT的RNase H活性相對于禽成髓細胞瘤病毒反轉錄酶較弱，更適合用來反轉錄較長的mRNA。M-MLV RT應用于以RNA為模板合成cDNA的第一條鏈。

注意：M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反轉錄酶，因此要得到和用AMV 反轉錄酶一樣產量的cDNA需加入更多單位的M-MLV反轉錄酶。

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)使用方法

1）使用方法簡介以用2mg總RNA為例。在無RNase離心管中，加入0.5mg引物至含總RNA的樣品中，總體積不大于15ml。70℃，5分鐘打開模板鏈形成的二級結構。立即放于冰上降溫防止二級結構恢復，隨后短暫離心使液體集中在離心管底。

2）加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。

注意：不要改變引物的加入比率。

M-MLV 5×Reaction Buffer                       5ml

dATP，10mM                                 1.25ml

dCTP，10mM                                 1.25ml

dGTP，10mM                                 1.25ml

dTTP，10mM                                 1.25ml

Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor         25 units

M-MLV RT                                    200 units

無核酸水至最后體積 25ml

3）輕輕混勻離心管，如果使用隨機引物在37℃孵育60分鐘，其他引物則42℃孵育。延伸溫度在37～42℃之間最佳。

4）M-MLV RT 用于合成cDNA的第一鏈。往后的合成則需要根據需要自行設計引物再次合成。

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)Buffer組成

M-MLV RT 5×Reaction Buffer

250mM     Tris-HCl（PH 8.3 室溫下）

375mM     KCl

15mM     MgCl₂

50mM     DTT

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)來源

大腸桿菌表達純化

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)保存條件

-20℃保存。避免經常凍融。