瑞氏染液的作用與應(yīng)用

瑞氏染液的作用與應(yīng)用

瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料，溶于甲醇，后解離為帶正電的美藍(lán)和帶負(fù)電的伊紅離子。伊紅通常為鈉鹽，有色部分為陰離子。美藍(lán)通常為氯鹽，有色部分為陽離子。甲醇的作用：一是溶解美藍(lán)和伊紅，使其解離為有色美藍(lán)正離子的和伊紅負(fù)離子。后兩者可以選擇性地吸附于血細(xì)胞內(nèi)的不同成分而使其著色；二是固定細(xì)胞形態(tài)，加速染色反應(yīng)，增強(qiáng)染色效果。

瑞氏染液染色原理：

瑞氏染色法使細(xì)胞著色既有化學(xué)親和反應(yīng)，又有物理吸附作用。瑞氏染料由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)的氧化物（天青）組成,其深于甲醇后,解離為帶正電的美藍(lán)和帶負(fù)電的伊紅離子。各種細(xì)胞由于所含化學(xué)成分不同，對染料的親和力也不一樣，因此，染色后各種細(xì)胞呈現(xiàn)出各自的染色特點(diǎn)。

瑞氏染液配置方法：

瑞士染料830gm或1g；

甲醇（AR） 500ml或600ml；

先稱干燥（事先放入溫箱干燥過一夜）瑞氏染料放置乳缽內(nèi)，用乳棒輕輕敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細(xì)粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著。再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(nèi)（好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復(fù)數(shù)次，至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口。存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存3個月以上為佳。

瑞氏染液使用說明：

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏染液染3分鐘,使標(biāo)本被其中甲醇所固定。

3、加等量PH6.4的磷酸鹽緩沖液(或等量超純水)輕輕晃動玻片, 與瑞氏染色液混勻，靜置5分鐘。

4、水洗、吸干、鏡檢。

5、細(xì)菌染成藍(lán)色，組織細(xì)胞胞漿紅色，細(xì)胞核藍(lán)色。

注意事項：

1、PH對細(xì)胞染色有影響。由于細(xì)胞中各種蛋白均為兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定。對某一蛋白質(zhì)而言，如環(huán)境PH<PI（蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)），則該蛋白質(zhì)帶正電荷，即在酸性環(huán)境中正電荷增多，易與酸性伊紅結(jié)合，染色偏紅；相反，則易與美藍(lán)天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。為此，應(yīng)使用清潔中性的玻璃片，稀釋液必須用PH6.4～6.8的確良緩沖液。沖洗玻片必須用流水。

2、未干透的血膜不能染色，否則染色時血膜易脫落。

3、染色時間與染液濃度、染色溫度成反比；而與細(xì)胞數(shù)量成正比。

4、沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)用流水沖去，以防染料沉淀在血膜上。

5、如血膜上有染料顆粒沉積，可加少許甲醇溶解，但需立即用水沖洗掉甲醇，以免脫色。

6、染色過淡，可以復(fù)染。復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液，創(chuàng)造良好的染色環(huán)境，而后加染液，或加染液與緩沖液的混合液，不可先加染液。

7、染色過深可用水沖洗或浸泡水中一定時間，也可用甲醇脫色。

8、染色偏酸或偏堿時，均應(yīng)更換緩沖液再重染。

瑞氏染液為索萊寶常備貨產(chǎn)品，貨號為G1040。瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)（Methvlem blue）和酸性染料伊紅（Eostm Y）組成的復(fù)合染料，溶于甲醇 。在正常情況下，血膜外觀染成淡紫紅色。顯微鏡下，紅細(xì)胞呈粉紅色，在厚薄均勻處，略有碟狀感。白細(xì)胞漿中顆粒清楚，并顯示出各種細(xì)胞*的色彩。細(xì)胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。