QuickShuttle轉染試劑 QuickShttleTM Transfection Reagents

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QuickShttleTM Transfection Reagents
（#KX0110041，0.8 ml ）
產品描述：
QuickShuttle是上海索萊寶生物科技有限公司新近研發的陽離子轉染試劑，具有、低毒和易于使用等優點，推薦用于哺乳動物細胞和昆蟲細胞的瞬時轉染以及穩定細胞系構建，可以將轉染實驗操作縮短到一分鐘即可完成。
重要提示：
1、以24孔細胞板轉染實驗為例，推薦一次（即每孔）轉染實驗的低內毒素質粒DNA用量為2ug，轉染試劑用量為3-5ul（轉染試劑的適用量需要根據不同細胞和不同培養基來優化，但理論上不超出3-5ul范圍），轉染實驗中使用無菌生理鹽水稀釋質粒和轉染試劑即可。
2、為獲得高轉染效率并盡可能降低細胞毒性，建議轉染時細胞密度控制在50-80%范圍內，而且在不影響轉染效率的前提下，盡可能減少轉染試劑的用量。
3、QuickShuttle轉染試劑極大簡化了轉染步驟，轉染試劑和質粒混合后無需室溫靜置孵育，可直接加入含血清的細胞培養基中進行轉染，而且無需在轉染后補加血清和更換培養基。
4、如果實驗目的在于篩選抗藥性穩定細胞系，使用QuickShuttle進行轉染實驗可做進一步簡化，即細胞傳代后可直接進行轉染實驗，從而節省了18-24小時的轉染前細胞培養時間。
5、QuickShuttle轉染試劑建議儲存溫度為2-8℃，但在-30℃到室溫范圍內均可長時間穩定保存。
轉染步驟：
下述所有實驗步驟均針對哺乳動物貼壁細胞在24孔細胞板中的轉染實驗優化建立，不同細胞和不同培養基可能需要優化轉染試劑的用量以獲得佳實驗效果。質粒DNA：請用能夠去除內毒素的方法制備高質量的質粒DNA。稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，高壓消毒或除菌過濾。
1.轉染前18-24小時接種細胞到24孔細胞板中，每孔5-10*104細胞，1ml*培養基。備注：如果篩選抗藥性穩定細胞系，可以考慮簡化的實驗步驟，即在細胞傳代后直接按下述步驟2-5進行轉染實驗，無需18-24小時的等候時間。
2.將2ug質粒DNA和3-5ul轉染試劑分別稀釋到50ul生理鹽水中。備注：轉染試劑的適用量需要根據不同細胞和不同培養基來優化，但理論上不超出3-5ul范圍。
3.合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其他轉染試劑所需的10-30分鐘的等待時間。
4.將上述復合物直接加入到24孔細胞板中的細胞培養基中，輕搖細胞板以混勻。備注：轉染復合物可直接加入含血清的細胞培養基中進行轉染實驗。在極少情況下會出現貼壁細胞脫落現象，可先從待轉染細胞孔中吸取500μl培養基與轉染復合物預混后再加入細胞中；若在細胞瓶中進行轉染，直接加入到無細胞貼壁的側面并搖勻即可。
5.將細胞板移至37℃/5%CO2孵箱中進行培養。備注：無需在轉染后4-6小時補加血清或更換培養基。
6.24-72小時后根據實驗需要進行瞬時表達分析或穩定細胞系加壓篩選。
附表：
培養器皿
表面積（cm2）
培養基用量（ml）
DNA用量（μg）/生理鹽水用量（μl）
轉染試劑用量（μl）/生理鹽水用量（μl）
96孔板
0.4
0.2
0.4/25
0.8/25
24孔板
2
1
2/50
4/50
12孔板
4
1.5-2
4/50
8/50
6孔板（包括35mm培養皿）
9
2-3
8-10/100
16-20/100
60mm培養皿
27
6-8
20-25/200
40-50/200
25 cm2培養瓶
25
6-8
20-25/200
40-50/200
100mm培養皿
75
15-20
40-50/400
80-100/400
75 cm2培養瓶
75
20-25
40-50/400
80-100/400